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白色念珠菌菌华彩彩票液制备

作者:admin 发布时间:2019-07-27 06:04

  白色念珠菌菌液制备_生物学_自然科学_专业材料。白色念珠菌菌液制备: 接种白色念珠菌的新颖培育物至 10ml 校正马丁培育基 中, 23~28℃培育 24~28 小时;取此培育液 1ml 加 0.9%无菌氯化钠溶液 9ml ,采用 10 倍递增稀释

  白色念珠菌菌液制备: 接种白色念珠菌的新颖培育物至 10ml 校正马丁培育基 中, 23~28℃培育 24~28 小时;取此培育液 1ml 加 0.9%无菌氯化钠溶液 9ml ,采用 10 倍递增稀释法稀释至 10-6~10-7,制成每 1ml 含菌数 50~100cfu 的孢子悬浮液。 黑曲菌菌液制备:接种黑曲菌的新颖培育物至校正马丁琼脂斜面培育基中, 23~28℃培育 5~7 天,出席 3~5ml0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,吸至 无菌试管中,取 1ml 加无菌氯化钠溶液 9ml,采用 10 倍 递 增 稀 释 法 ,稀 释 至 10-4~10-6,制成每 1ml 含菌数 50~100cfu 的孢子悬液。 供试液的制备 无抑菌活性的供试品供试液的制备 稀释剂: PH7.0 无菌氯化钠 -卵白胨缓冲液 液体供试品:供试品 10ml 置锥形瓶中,加 90ml 稀释剂,混匀,行动供试液 (1:10) 固体、半固体、浓厚性供试品:称取供试品 10g 置锥形瓶中,加稀释剂至 100ml,混匀后,行动供试液( 1:10)。 具有抑菌活性的供试品试液的制备 当供试品具有抑菌活性时,须先袪除抑菌活性,其设施如下: 培育基稀释法:取供试液 2ml,每 0.2ml 的供试液注一皿或每 0.1ml 的供试液 注一皿;或取供试液 1ml 每 0.5ml 的供试液注一皿,倾注 15ml 的培育基,测 定细菌、霉 菌 及 酵 母 菌 的 菌 数 , 混 匀 , 凝 固 , 培 养 。 每1ml 供试液所注的平皿发展的菌数 之和即为 1ml 的菌落数。估量每 1ml 供试液的均匀菌落数,按平皿法本领规定通知菌 数。限度菌检验时可加大增菌液的用量。 离心浸淀集菌法:取必定量的供试液, 3000 转/分手心 20 分钟(供试液如有 浸 淀 , 先 以500 转/分手心 5 分钟,取统共上清液再离心),弃去上清液, 留底部集菌液约 2ml,加稀释液补至原量。 薄膜过滤法:取章程量试验能够用的最低稀释剂供试液,过滤, 冲 洗 吗 , 按 薄膜过滤法测定其菌落数。 中和法:采纳适宜的中和剂袪除供试品的抑菌活性后测定。 菌液组:测定所加的试验菌数。 采用平皿法, 取试验用的 1ml 菌液 (约 50 ~ 100cfu ) 判袂注入平皿中,速即倾入培育基,每株试验菌平行制备 2 个平皿,按平皿法测定其菌 落数。 1.5 试验组 平皿法: 取试验能够用的最低稀释级 1ml 供试液和 50 ~ 100cfu 试验菌, 判袂注 入平皿中,速即倾入培育基,每株试验菌平行制备 2 个平皿,按平皿法测定其菌落数。 1.5.2 培育基稀释法 (平皿法) : 取试验能够用的最低稀释级 1ml 供试液判袂注入 N 个平 皿中,每个平皿再注入 50 ~ 100cfu 试验菌,判袂注入平皿中,速即倾入培育基,每株 试验菌均匀制备 2 个平皿,按平皿法测定其菌落数。 1.5.3 薄膜过滤法:取章程量试验能够用的最初级供试液,过滤,冲洗, 正在结尾一次 的冲洗液中出席 50 ~ 100cfu 试验菌,过滤,按薄膜过滤法测定其菌落数。起码要一张 膜。 1.5.4 离心浸淀集菌法:取章程量试验能够用的最低稀释剂供试液,如 供试液含很众 药 渣 , 先 以 500 转 / 分钟离心 3 ~ 5 分 钟 , 取 全 部 上 清 液 , 再 以 3000 转 / 分手心 20 分钟, 取下面 1ml 液体, 并用稀释剂洗地管底, 将洗涤液与 1ml 液体一齐采用平皿法或薄膜过 滤法计数。 1.6 供试品比照组 取章程量供试液, 按菌落计数设施测定供试品本底菌数 (设施和试验组不异) 稀释剂比照组 若供试剂须要离别、乳化、中和、离心或薄膜过滤法额、等统治时,应推广稀释剂比照 组。 用稀释剂替代供试品, 出席试验菌。 最终浓度为每 1ml 供试液含 50 ~ 100cfu , 按试 验组的供试液制备设施和本领设施估量。 接收率估量 试验组接收率估量 试验组的菌接收率 =菌 液 组 的 平 均 菌 落 数 数供 试 品 对 照 组 平 均 菌 落 验 组 的 菌 回 收 率 ?100% 稀释剂比照组接收率估量 试验组的菌接收率 = 菌 液 组 的 平 均 菌 落 数 数 稀 释 剂 对 照 组 平 均 菌 落 × 100% 计数设施验证起码应实行 3 次独立平行试验,并判袂估量各试验菌每次试验的接收率。 1.9. 正在 3 次独立的平行试验中,稀释剂比照组的菌接收率(稀释剂比照组的均匀菌落 数减去供试品比照组的均匀菌落数占菌液组的品均菌落数的百分 率)≥ 70% ,华彩彩票应采用自 然浸降法、培育基稀释法、离心浸淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等设施或纠合利用这 些设施袪除供试品的抑菌活性,并从新实行设施验证,是试验组菌接收率大 于 70% 限度菌考验设施与验证 当修筑药品的微生物限制检验时, 应实行限度菌检验设施的验证, 以确认所采用的设施 适合于该药品的限度菌检验设施测定。 若药品的组分或原考验条目产生改换能够影响检 验结果时,考验设施应实行从新验证。验证试验也可与供试品的限度菌检验 同时实行。 验证用菌株 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒梵衲菌、铜绿假单胞菌为验证用菌株,菌株 传代次数不得高出 5 代。 菌液制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒梵衲菌、铜绿假单胞菌的 新颖培育物至 10ml 养分肉汤培育基中, 35~37℃培育 18~24 小时;判袂取 培育液 1ml 加 0.9%无菌氯化钠溶液, 采用 10 倍递增稀释法, 稀释至 10-5~10-7, 制成每 1ml 含菌数 10~100cfu 的菌悬液。 阴性菌比照组设立阴性菌比照组是为了验证该限度菌检验设施的专属性。 设施同试验组,验证大肠埃希菌、大肠菌群、梵衲菌检验法时的阴性比照菌采用金 黄色葡萄球菌;验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌检验设施时的阴性比照菌 采用大肠埃希菌。阴性比照菌不得检出。试验组 通例法大肠埃希菌:取相当于 1g 或 1ml 供试品的供试液至 1 0 0 m l 胆盐乳糖 培育基中,阳 菌 葡 性 菌 阴 10~ 对 性 照 菌 组 对 加 照 入 加 大 入 肠 金 埃 黄 希 色 10~100cfu, 萄 球 菌 100cfu , 35 ~ 37 ℃培育 18 ~ 24 小时,取此培育物按《微生物限制检测规范操作规程》 大肠埃希菌项下章程检验。 2.4.1.2 大肠菌群:取含适量(不少于 10ml )的胆盐乳酸发酵培育基管 3 支,判袂加 入含供试品 1g 或 1ml 、 0.1g 或 0.1ml 、含供试品 0.001g 或 0.001ml 的供试液,阳性菌 比照出席大肠埃希菌 10 ~ 100cfu ,阴性菌比照计入近换色葡萄球菌 10 ~ 100cfu , 35 ~ 37 ℃培育 18 ~ 24 小时,按《微生物限制检测规范操作规程》大肠菌群项下章程检验。 2.4.1.3 梵衲菌:取供试品 10g 或 10ml ,直接或统治后接种至适量(不少于 200ml ) 的养分肉汤培育基中, 用均浆仪或其他适宜设施混匀, 阳性菌比照加梵衲菌 10 ~ 100cfu , 阴性菌比照出席近换色葡萄球菌 10 ~ 100cfu , 35 ~ 37 ℃培育 18 ~ 24 小时。按《微生物 湖南金旺稀贵药业有限公司 GMP 执掌文献 限制检测规范操作规程》梵衲菌项下章程检验。 2.4.1.4 铜绿假单胞菌: 取相当于 1g 或 1ml 供试品的供试液至 100ml 胆盐乳糖培育基 中 菌 10 ~ 100cfu , 10 阴 性 菌 对 照 加 入 大 肠 埃 希 菌 , 阳 性 菌 对 照 加 入 铜 绿 假 单 胞 ~ 100cfu35 ~ 37 ℃培育 18 ~ 24 小时。按《微生物限制检测规范操作规程》梵衲菌项下规 定检验。 2.4.1.5 金黄色葡萄球菌: 取相当于 1g 或 1ml 供试品的供试液至 100ml 胆盐乳糖培育 基 中 , 阳 性 菌 对 照 加 入 铜 绿 假 单 胞 菌 1 0 ~ 100cfu , 阴 性 菌 对 照 加 入 大 肠 埃 希 菌 10 ~ 100cfu35 ~ 37 ℃培育 18 ~ 24 小时。按《微生物限制检测规范操作规程》金黄色葡萄球 菌项下章程检验。 2.4.2 培育基稀释法:供试品有抑菌功用,放大培育基量由 1 : 100 放大到 1 : 300 、 1 : 500 或 1 : 1000 ,因为容器提及局限,凡是放大到 500ml 或 1000ml ,本法实用于抑菌作 用不签的样品。 2.4.3 薄膜过滤法:采用薄膜过滤法时,取章程量供试液,过滤,冲洗, 试验菌应加 正在结尾一次冲洗液中,取统共上清液,再以 3000 转 / 分手心 20 分钟取下面液体,并将 适量的稀释剂洗涤管底的洗涤液一并移入同瓶增菌液中, 培育, 本法实用于中等抑菌作 用的样品。 2.4.4 中和法:正在供试品溶液中出席相应的中和剂一减除供试品中抑菌 成份的功用, 中和剂应对微生物无毒性, 与抑菌成份连系后的产品应对微生物无毒性, 或有毒性但不 影响待检菌的检出。 2.5 结果剖断 起码实行 3 次独立平行试验。 阴性菌比照组不得检出阴性比照菌。 若试验组检出试验菌, 依照该供试液制备设施和限度菌检验法实行该供试品限度菌的检验; 若试验组未检出试 验菌,应采用自然浸降法、培育基稀释法、离心浸淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方 法或纠合利用这些设施袪除供试品的抑菌活性,并从新实行设施验证。 3. 验证的施行 3.1 细菌、霉菌、酵母菌计数设施验证纪录及限度菌考验设施验证纪录(睹附录) 。 3.2 理会数据,归纳通盘验证流程,得出验证结论。 3.3 验证流程中产生的相当景况,依照《偏向统治顺序》实行统治。 4. 正在验证 4.1 验证时的考验条目爱你产生改换能够影响考验结果时。 5. 附录